Four variants of the potassium acetate procedure for DNA extraction from ixodid ticks at different stage of their life cycles were evaluated and compared with phenol-chloroform and ammonium hydroxide methods. The most rapid and most efficient variant was validated in the DNA extraction procedure from the engorged ticks collected from bovine, canine as well as from house ticks for the screening of Borrelia burgdorferi sensu lato, Anaplasma spp. and Babesia spp. The ammonium hydroxide procedure was used for non-engorged ticks. All the variants were efficient and allowed obtaining PCR-quality material according to the specific amplification of 16S rRNA gene fragment of the original tick. DNA extracted from the ticks under the study was tested by multiplex PCR for the screening of tick-borne pathogens. Anaplasma spp. and Babesia spp. amplification products were obtained from 29/48 extracts. Ammonium hydroxide protocol was not efficient for two extracts. Detection of amplification products from the PCR indicated that DNA had been successfully extracted. The potassium acetate procedure could be an alternative, rapid, and reliable method for DNA extraction from the ixodid ticks, mainly for poorly-resourced laboratories.

This study was aimed to determine the in vitro antifungal activity of four essential oils on three pathogens causing spotted grains in rice Curvularia lunata (Wakker) Boedijn, Sarocladium oryzae (Sawada) W. Gams & D. Hawksworth and Bipolaris oryzae (Breda de Haan) Shoemaker. The bioassay was performed as a completely randomized design; the method used consisted of filter paper disks soaked with the oils and placed in direct contact with the phytopathogenic fungi. The radial growth was evaluated daily for 96 hours. The oils of Piper auritum Kunth (Caisimón anise) and Piper aduncum subsp. ossanum (C. DC.) Saralegui (Platanilllo of Cuba) produced complete growth inhibition of the three isolates. Similarly, the oil of Melaleuca quinquenervia (Cav) ST Blake (melaleuca) affected the growth of S. oryzae and B. oryzae, while that of Citrus sinensis (L.) Osbeck (sweet orange) inhibited only B. oryzae growth. The oils of P. aduncum and P. auritum were the most prominent; further research on their use as fungicides is suggested.

Este trabajo tuvo como objetivo determinar la actividad antifúngica in vitro de cuatro aceites esenciales sobre tres patógenos causantes del manchado del grano en arroz (Curvularia lunata (Wakker) Boedijn, Sarocladium oryzae (Sawada) W. Gams & D. Hawksworth y Bipolaris oryzae (Breda de Haan) Shoemaker). El bioensayo se realizó según un diseño completamente aleatorizado, se utilizó el método de discos de papel de filtro inoculados con los aceites, colocados en contacto directo con los discos de los hongos fitopatógenos. Se evaluó el crecimiento radial de los hongos diariamente hasta las 96 horas. Los aceite de Piper auritum Kunth (caisimón de anís) y Piper aduncum subsp. ossanum (C. DC.) Saralegui (platanillo de Cuba) produjeron inhibición total del crecimiento en los tres aislados. De igual modo, el de Melaleuca quinquenervia (Cav) S.T. Blake (melaleuca) afectó el crecimiento de S. oryzae y B. oryzae; mientras que, el de Citrus sinensis (L.) Osbeck (naranjo dulce) solo inhibió a B. oryzae. Los aceites de P. aduncum y P. auritum, resultaron ser los más destacados. Se sugiere continuar investigando en el empleo de estos como fungicidas.

The aim of this work was to determine the action modes of Trichoderma spp. against Didymella bryoniae (Fuckel) Rehm. The competition by the substrate, antibiosis and mycoparasitism of Trichoderma asperellum Samuels (Ta), Trichoderma harzianum Rifai (Th) and Trichoderma sp. (T.) was assessed by the dual culture method. After 72 hours, all the isolates showed an inhibitory effect over the pathogen growth higher than 50%. The isolates Ta. 12, Ta. 79, Ta. 85 and T. 81 grew more than 75% of the plate area; thus, they were placed in the class 1 of Bell's scale. The growth rate of the two latter isolates increased from the 72 h, which could be related to attractive compounds emitted by the pathogen. Th A-34 and Ta. 85 presented the best indicators of parasitism with three types of hyphal interaction (coiling, vacuolization and penetration). The volatile metabolites produced by Th-34, Ta. 79 and Ta. 85 and those non-volatile emanating from Th A-34, Ta. 79 and T. 81 inhibited the pathogen growth from the 72h. According to the modes of action exhibited by the different isolates, Th A-34 and Ta. 85 were chosen as the best isolates for the control of D. bryoniae. They are emerging as potential candidates for biopesticide active ingredients, although their evaluation in the control of D. bryoniae under field conditions is required.

El presente trabajo tuvo como objetivo determinar los modos de acción de aislamientos de Trichoderma spp. frente a Didymella bryoniae (Fuckel) Rehm, mediante la técnica de cultivo dual. Se evaluaron la competencia por el sustrato, el micoparasitismo y la antibiosis de aislamientos de Trichoderma asperellum Samuels (Ta.), Trichoderma harzianum Rifai (Th.) y Trichoderma sp. (T.). A partir de las 72 horas, todos los aislamientos presentaron efecto inhibitorio del crecimiento del patógeno superior al 50%. Los aislamientos Ta. 12, Ta. 79, Ta. 85 y T. 81 crecieron más del 75% del área de la placa, por lo que se ubicaron en la clase 1 de la escala de Bell. La velocidad de crecimiento de los dos últimos aislamientos aumentó a partir de las 72h, lo que pudiera estar relacionado con compuestos atrayentes, emanados por el patógeno. Los mejores indicadores de parasitismo los presentaron los aislamientos Th. A-34 y Ta. 85 con tres tipos de interacción hifal (enrollamiento, vacuolización y penetración). Los metabolitos volátiles producidos por Th. A-34, Ta. 79 y Ta. 85 y no volátiles emanados de Th. A-34, Ta. 79 y T. 81, inhibieron el crecimiento del patógeno desde las 72h. De acuerdo a los modos de acción exhibidos, los aislamientos Th. A-34 y Ta. 85 se perfilan como posibles candidatos a ingredientes activos de bioplaguicidas, lo que requiere de su evaluación en el control de D. bryoniae en condiciones de campo.

In this work, the antifungal activity of four natural extract essential oils was determined in vitro on three isolates of Fusarium spp (F2 and F5 of Fusarium solani (Martius) Appel & Wollenweber emend. Snyder & Hansen and F3 of Fusarium redolens Wollenweber), pathogens in the tomato (Solanum lycopersicum L.) crop in Cuba. The bioassay was performed as a completely randomized design using the method of filter paper disks inoculated with the oils placed in direct contact with the discs of the Fusarium isolates. The fungal radial growth was evaluated for up to 96 hours. The Casimon of anise (Piper auritum Kunth) oil produced complete growth inhibition of the isolates; meanwhile, the oil from the platanillo of Cuba (Piper aduncum subsp. ossanum (C. DC) Saralegui) showed to have a high fungistatic power. Melaleuca oil (Melaleuca quinquinervia (Cav) ST Blake showed little growth inhibition in the three isolates, whereas any of the isolates was inhibited by Citrus (Citrus sinensis L. Osbeck) at any of the concentration tested, which limits the possible use of these in the practice. The Casimon of anise oil was the most prominent, and it is recomended to be further nvestigated for its properties for the control of plan pathogens.

En este trabajo se determinó la actividad antifúngica in vitro, de cuatro aceites esenciales, sobre tres aislados de Fusarium spp. (F2 y F5 de Fusarium solani (Martius) Appel & Wollenweber emend. Snyder & Hansen y F3 de Fusarium redolens Wollenweber), patógenos en el cultivo del tomate (Solanum lycopersicum L.) en Cuba. El bioensayo se realizó según un diseño completamente aleatorizado y se utilizó el método de discos de papel de filtro inoculados con los aceites, colocados en contacto directo con los discos de los aislados de Fusarium. Se evaluó el crecimiento radial de los hongos hasta las 96 horas. El aceite de Piper auritum Kunth (caisimón de anís) provocó total inhibición en el crecimiento de los aislados del fitopatógeno; por su parte, el aceite de Piper aduncum subsp. ossanum (C. DC.) Saralegui (platanilllo de Cuba) demostró poseer alto poder fungistático. El aceite de Melaleuca quinquenervia (Cav) S.T. Blake (melaleuca) produjo poca inhibición del crecimiento en los tres aislados, y el de Citrus sinensis L. Osbeck (naranjo dulce) (a la concentración evaluada) no inhibió ningún aislado, lo que limita el posible uso de estos en la práctica. El aceite de caisimón de anís, resultó ser el más destacado, se recomienda continuar investigando sus propiedades para el control de fitopatógenos.

The aim of this work was to determine the in vitro antifungal activity of ten essential oils on Alternaria solani SORAUER. The effect by direct contact and exposure to vapors was evaluated. The bioassays were performed using a completely randomized design and the method of paper discs inoculated with the oils facing phytopathogen discs; the fungal radial growth was evaluated. All the oils, except those from Citrus sinensis (L.) Osbeck (sweet orange), inhibited the mycelial growth until the seventh day. At day 14, a total inhibition was observed in the treatments with the oils from Pimpinella anisum L. (anise), Ocimum basilicum L. (white basil), Ocinum basilicum L. var. genovese (Genovese basil), and Piper auritum Kunth (anise caisimon). No fungicidal effect was shown by the volatile metabolites of the oils; however, the inhibition of A. solani mycelial growth was observed in the treatments with the extracts of Ruta chalepensis L. (ruda) and P. auritum. These results open new perspectives for the control of this pathogen.

Este trabajo tuvo como objetivo determinar la actividad antifúngica in vitro de diez aceites esenciales sobre Alternaria solani Sorauer, importante patógeno de las solanáceas. Se evaluó el efecto por contacto directo y por exposición a los vapores. Los bioensayos se realizaron según diseño completamente aleatorizado, se utilizó el método de discos de papel inoculados con los aceites, enfrentados a discos del fitopatógeno y se evaluó el crecimiento radial del hongo. Todos los aceites, excepto Citrus sinensis (L.) Osbeck (naranjo dulce), inhibieron el crecimiento micelial hasta los 7 días. A los 14 días se observó inhibición total en los tratamientos con los aceites de Pimpinella anisum L. (anís), Ocimum basilicum L. (albahaca blanca), Ocimum basilicum L. variedad genovese (albahaca genovesa) y Piper auritum Kunth (caisimón de anís). Los metabolitos volátiles de los aceites no mostraron efecto fungicida; no obstante se observó inhibición del crecimiento micelial de A. solani en los tratamientos con los extractos de Ruta chalepensis L. (ruda) y Piper auritum. Los resultados abren nuevas perspectivas para el control de este patógeno.

The use of natural antimicrobials is an alternative that is in development and exploitation and, among them, the essential oils have a great potential. The aim of this work was to determine the chemical composition of essential oil of Piper marginatum Jacq. and evaluate its antibacterial and antifungal activities against microorganisms of importance in the agricultural sphere. The essential oil of P. marginatum was obtained by hydrodistillation using an apparatus type Clevenger. Its yield was determined and its chemical composition was investigated by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS). The antibacterial activity was evaluated by the agar diffusion method against Xanthomonas albilineans (Ashby) Dawson, Xanthomonas campestris pv campestris (Pammel) Dawson, Pseudomonas solanacearum Smith, Pseudomonas celebensis Gäumann, Pseudomonas syzygii Roberts et al. and Pseudomonas fluorescens Migula. The antifungal effect of the oil was determined on Alternaria solani Sor. The essential oil (2,18% v/p) is constituted mainly of oxygenated compounds with isosafrole and nothosmyrnol as the major components. The oil showed a bactericidal effect against X. albilineans and X. campestris pv campestris and a fungistatic effect against A. solani. There are great opportunities for the development of the essential oil of P. marginatum as an antimicrobial agent, considering its high yield and activity against the microorganisms studied.

El uso de antimicrobianos de origen natural es una alternativa que está en vía de desarrollo y explotación y, dentro de ellos, los aceites esenciales tienen grandes potencialidades. El objetivo de este trabajo fue determinar la composición química del aceite esencial de Piper marginatum Jacq. y evaluar su actividad antibacteriana y antifúngica frente a microorganismos de importancia en la esfera agrícola. El aceite esencial de P. marginatum se obtuvo por hidrodestilación empleando un equipo Clevenger. Se determinó su rendimiento y su composición química se investigó por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas (CG/EM). La actividad antibacteriana se evaluó por el método de difusión en agar frente a Xanthomonas albilineans (Ashby) Dawson, Xanthomonas campestris pv campestris (Pammel) Dawson, Pseudomonas solanacearum Smith, Pseudomonas celebensis Gäumann, Pseudomonas syzygii Roberts et al. y Pseudomonas fluorescens Migula. El efecto antifúngico del aceite se determinó sobre Alternaria solani Sor. El aceite esencial (2,18 % v/p) está constituido fundamentalmente por compuestos oxigenados y dentro de ellos los componentes mayoritarios resultaron ser el isosafrol y el notosmirnol. El aceite mostró un efecto bactericida frente a X. albilineans y X. campestris pv campestris y efecto fungistático frente a A. solani. Existen enormes posibilidades de desarrollo del aceite esencial de P. marginatum como agente antimicrobiano, considerando su elevado rendimiento y su actividad frente a los microorganismos estudiados.

Essential oils stand out as rapidly developing products and many applications in agriculture. Melaleuca quinquenervia (Cav) S.T. Blake, essential oil producer specie of the Myrtaceae family, has medicinal and insecticide properties, but its possibilities to be used in the control of pests in different crops are very important and must be further investigated. The aim of this work was to determine the chemical composition of M. quinquenervia essential oil and its acaricide and antimicrobial activity against agricultural pests. The essential oil was obtained by hydrodistillation using a Clevenger type-apparatus and the yield was determined. The chemical composition was investigated by GC/MS. Biological tests were conducted against fungi, bacteria and mites. The essential oil of M quinquenervia (yield: 2,97% (v / p)) is mainly composed of longifolene (32,95 %), 1.8-cineole (25,43 %), viridiflorol (7,76 %) and allo-aromadendrene (9,50 %). The essence has a promising antifungal effect against Alternaria solani Sor. and Fusarium sp.. The susceptibility of isolates of the latter plant pathogen showed differences with the greatest inhibition produced by F2. Xanthomonas albilineans (Ashby) Dawson was the most sensitive bacteria to the action of the oil, compared with Clavibacter michiganesis subsp. michiganesis (Smith) Davis et al showed only a slight activity at the highest dose tested. The antibacterial effect against X. albilineans was superior to that produced by the control antibiotic. The essential oil was highly toxic to mite causing 100% of mortality against females of Tetranychus urticae Koch, Panonychus citri (McGregor) and Raoiella indica Hirst, and 88,73 % on Tetranychus tumidus Banks. The essential oil of Melaleuca quinquenervia has potential for the development of new antimicrobials and acaricides to control pests in vegetables, citrus and sugar cane.

Los aceites esenciales se destacan como productos con un rápido desarrollo y múltiples posibilidades de aplicación en la agricultura. Melaleuca quinquenervia (Cav) S.T. Blake, especie de la familia Myrtaceae productora de aceite esencial, posee propiedades medicinales e insecticidas; sin embargo, sus posibilidades de empleo en el control de plagas son de gran importancia en diferentes cultivos y deben ser aún investigadas. El objetivo de este trabajo fue determinar la composición química del aceite esencial de M. quinquenervia y su actividad acaricida y antimicrobiana frente a plagas agrícolas. El aceite esencial se obtuvo por hidrodestilación con equipo Clevenger, se determinó su rendimiento y su composición química se investigó por CG/EM. Se realizó la evaluación biológica frente a hongos, bacterias y ácaros. El aceite esencial de M quinquenervia (rendimiento: 2,97 %, (v/p)) está compuesto mayoritariamente por longifoleno (32,95 %), 1,8-cineol (25,43 %), viridiflorol (7,76 %) y allo-aromadendreno (9,50 %). La esencia posee un efecto antifúngico promisorio frente a Alternaria solani Sor. y Fusarium sp.. La susceptibilidad de los aislados de este último fitopatógeno presentó diferencias, observándose la inhibición mayor frente al aislado F2. Xanthomonas albilineans (Ashby) Dawson fue la bacteria más sensible a la acción del aceite, frente a Clavibacter michiganesis subsp. michiganesis (Smith) Davis et al se evidenció una actividad ligera solo a la mayor dosis evaluada. El efecto antibacteriano frente a X. albilineans fue superior al producido por el antibiótico control. El aceite esencial fue altamente tóxico a los ácaros provocando un 100 % de mortalidad a las hembras de Tetranychus urticae Koch, Panonychus citri y Raoiella indica Hirst y un 88,73 % a las de Tetranychus tumidus Banks. El aceite esencial de Melaleuca quinquenervia posee potencialidades para el desarrollo de nuevos antimicrobianos y acaricidas para el control de plagas en hortalizas, cítricos y caña de azúcar.